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在這“草木蕭疏”的季節,帶你重新認識CD3e!

北京百奧賽圖基因生物技術有限公司2019年11月22日 10:48 點擊:174


背景介紹


CD3e( CD3e molecule)編碼CD3-epsilon多肽,與CD3-gamma,-delta,-zeta和體細胞受體alpha/beta或gamma/delta共同構成TCR-CD3復合物。此復合物在抗原識別和細胞內信號轉導途徑方面起著非常重要的作用。近年來,利用人CD3和腫瘤相關抗原(TAA)的雙特異性抗體進行抗腫瘤治療手段被廣泛研究。

但由于小鼠CD3復合體的胞外區與人類種間同源性相對較低,人CD3特異性治療抗體不能有效激活小鼠效應T細胞,需建立一個適合于評估人類CD3特異性治療的實驗動物模型。百奧賽圖人源化CD3e小鼠(B-hCD3e mice),為雙抗的藥效驗證提供了有力工具。

TCR-CD3 complex and its signal pathway[1]


mCD3e全人源化小鼠分析


將mCD3e全人源化替換為hCD3e,對純合后代脾臟,胸腺,PBMC及淋巴結進行流式細胞分析,觀察小鼠T細胞發育是否正常。


以上研究結果表明,相對于野生型,hCD3e全人源化純合小鼠脾臟,胸腺,PBMC及淋巴結中mCD3+細胞含量較低且CD4、CD8分化差異較大,表明全人源化策略致其T細胞發育過程受阻,此方案制備的小鼠不適于后續藥理藥效評價。

基于此,考慮到全人源化可能對mCD3e胞內信號傳遞的影響,百奧賽圖重新優化打靶方案,僅對mCD3e進行胞外區人源化改造,保留其鼠源的信號傳導功能,得到B-hCD3e mice.同樣對其純合后代脾臟,胸腺,PBMC及淋巴結進行流式細胞分析,結果如下:



以上研究結果表明,mCD3e胞外區人源化純合小鼠(B-hCD3e mice)脾臟,胸腺,PBMC及淋巴結中,各細胞細胞比例與野生型小鼠相比無顯著差異,表明T細胞分化未受胞外區人源化改造影響。

不是所有人源化小鼠都能有正常功能,不是所有CD3人源化小鼠都叫B-hCD3e mice哦!

后續基于B-hCD3e mice模型的體外檢測及體內藥效等實驗數據也進一步證明了該模型的優勢所在,具體信息如下所示:B-hCD3e mice基本信息
 

基本信息




打靶策略


蛋白表達分析

流式分析結果顯示:野生型 C57BL/6 小鼠中檢測到mCD3+蛋白表達,純合B-hCD3e小鼠中檢測到hCD3+蛋白表達。 


體外檢測CD3抗體激活T細胞


從野生型C57BL/6和純合B-hCD3e小鼠的脾細胞中分離T細胞 (n=4),與抗CD3抗體(B-hCD3e, anti-hCD3;C57BL/6, anti-mCD3)及抗mCD28抗體孵育24h, 48h,72h。ELISA檢測IFN-γ and IL-2.

結果表明:IFN-γ 和 IL-2的表達水平在B-hCD3e和C57BL/6中無顯著差異。

CD3抗體藥效實驗

   

C57BL/6(A) 和B-hCD3e(B)接種MC38細胞系,待腫瘤體積約150±50mm3 后分組(n=5),結果顯示:兩種小鼠模型中,mPD-1抗體均顯著抑制腫瘤生長,表明:胞外區人源化改造對B-hCD3e小鼠T細胞的胞內信號傳遞無明顯影響。同時,hCD3e抗體顯著促進B-hCD3e小鼠腫瘤生長,而對C57BL/6小鼠腫瘤的生長基本無影響。進一步研究表明:給藥(hCD3e抗體)后出現AICD效應,B-hCD3e小鼠T細胞被清除,進而促進腫瘤生長。


流式檢測外周血中B細胞和T細胞比例


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結果顯示:hCD3抗體組中,由于hCD3e抗體引起AICD效應,T細胞比例顯著降低。但B細胞比例無明顯變化。(A)與hIgG Ab相比,CD19細胞各組間無顯著性差異。(B)與hIgG Ab相比,h-CD3 Ab治療后血液中TCR-β%降低。


基于B-hCD3e小鼠的雙特異性抗體藥效實驗


接種hCD19-MC38細胞系至小鼠皮下,腫瘤組織接近150±50mm3時進行分組(n=6),注射高、中、低不同劑量的Blinatumomab。

結果表明:高劑量的hCD3e雙特異性抗體(Blinatumomab)能夠顯著抑制腫瘤生長。證明B-hCD3e小鼠可以評估雙特異性抗體體內藥效。A.腫瘤體積±SEM B.小鼠平均體重±SEM。


參考文獻


[1]Immunology. 2018 Jan;153(1):42-50. doi: 10.1111/imm.12809. Epub 2017 Sep 5.


百奧賽圖雙抗動物模型列表


  


百奧賽圖雙抗細胞系模型列表



(來源: 北京百奧賽圖基因生物技術有限公司


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