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安捷倫液相色譜使用問題與解決方案 Agilent LC 問題與答案

安捷倫科技2008年5月8日 19:33 點擊:6319

安捷倫液相色譜使用問題與解決方案 Agilent LC 問題與答案
1 如何成為真正的液相高手
1。 一定要珍惜儀器廠商提供的各種培訓,因為他們的培訓很有針對性,而且很專業。
2 。要多做,液相是一個比較復雜的系統,在做樣的過程中,總會遇到各種問題,通過自己的大腦解決問題,慢慢積累就會穴道很多東西。其次要敢于動手,不要總擔心會把儀器弄壞,拆儀器的時候細心一點就好了,記著各個部件的順序,連接方式。動手次數多了,成功的機會就多了,也就更有信心了。
3。要看一些相關理論的書籍,要了解一些關于液相的分離原理,如何優化色譜系統和峰形,能夠自己解決一些分離的問題。這樣才是一個液相高手。
如果只是會很熟練的使用工作站和維修儀器,排除故障,我覺得這只是一個操作高手,而不是一個真正的液相高手。

2 新裝82341 GPIB 板,如何與ChemStation 通訊?
在 LC ChemStation CD-ROM 中有安裝說明,還包括驅動程序安裝信息。請在 Windows® Explorer 中查看子目錄: \Manuals\Installation\LC Systems。您在此處可找到《安裝手冊》,其中包含有關如何安裝 GPIB 板以及如何調用驅動程序的逐步操作說明。

3 為什么進樣后在工作站在線圖譜上看不到紅色開始線?
ChemStation 軟件有一個“在線圖譜”窗口,在此窗口中可顯示從所連接的檢測器接收到的所有信號。當進樣樣品時,會在“在線圖譜”窗口中顯示一條豎直的紅色“開始線”。這條紅色線標志著啟動該軟件進行原始數據的收集。如果不顯示這條紅色線,則不會收集數據。 如果不顯示“開始線”,請檢查檢測器上的遙控電纜(如果是 1050 或 1090 系列液相色譜儀的話)。如果缺少遙控電纜,則需要進行安裝。如果安裝了模-數轉換箱或板 (35900 ADC),則需要從模-數轉換設備到液相色譜儀拉一根遙控電纜。檢查所有的 CAN 電纜,確保它們都連接到 1100 系列液相色譜儀上

4 完美的波長如何選擇
做一個新的方法,關鍵是選擇好的儀器條件,更關鍵的是波長正確。但是怎樣的波長才算是完美的那,比如說我已經作了全掃描,那么怎么去選擇波長哪???一般選擇最大吸收波長為檢測波長,當然也要結合自己的實際情況來中和一下如果要達到最大檢測靈敏度,最大吸收波長是首位選擇。如果你使用的是DAD,那么建議你將Sample WL設定為最大吸收波長,Bandwidth不能低于你設定的slit的值。默認推薦的Bandwidth為半峰寬。如果你在一次分析中有最大吸收波長不同的物質需要同時檢測,可以使用檢測器的Timetable進行波長的切換避免選用低波長,波長越長越容易做

5 柔性不銹鋼毛細管線外面的彩色標記是什么意思?
安捷倫柔性不銹鋼管線外部的彩色標記表示管的內徑 (ID): 紅色 表示內徑為 0.12mm 或 0.005 英寸。 綠色 表示內徑為 0.17mm 或 0.007 英寸。 藍色 表示內徑為 0.25mm 或 0.010 英寸。 橙色 表示內徑為 0.50mm 或 0.020 英寸。

6 更換活塞密封圈后,建議采用什么磨合程序?
注意這個程序適合于反相密封圈,但不適合于正相密封圈。還會損壞正相密封圈。 安裝新的密封圈后,進行最初的“磨合”期。在至少 350bar 的反壓下泵入異丙醇 15-30 分鐘。這最好通過使用原來的色譜柱或陰尼管線來產成壓力.。 有關 1100 系列 LC 泵的密封圈磨合程序,請參見此附件。

7 1050、1100 系列 LC 泵的活塞密封圈和活塞的部件號是什么?
舊部件號 新部件號 活塞密封圈 5062-8516 5063-6589 (2pk) 活塞 5062-2441 5063-6586 注意:同時使用新的活塞和密封圈時,不再需要固定器 (01018-22706)。

8 為什么燈不亮?
很可能是燈老化或燈壞了。請按照下列診斷方法對檢測器進行測試。如果需要,則請更換燈。 如果問題依然存在,則請致電安捷倫科技公司。在中國,請撥打800 820 3278

9 什么原因導致液相色譜儀壓力過高?
可能的原因:
1. 排氣閥里面的 PTFE 濾蕊堵塞。
2. 壓力上限設置太低。
3. 壓力傳感器堵塞。
建議的措施:
1. 打開排氣閥。如果壓力依然很高,則更換排氣閥內的 PTFE 濾芯。
2. 查看軟件的壓力上限設置并確保設置值適于分析。
3. 檢查系統內的堵塞部位。(如下所述) 要檢查是否堵塞,請采用隔離系統的方法來排除故障: 將安裝的色譜柱、預色譜柱和預色譜柱過濾器摘開。
①. 如果壓力恢復到正常值,則在色譜柱的位置安裝 ZDV 接頭。 A 如果壓力正常,則色譜柱、預色譜柱或過濾器是產生問題的原因。請進行更換。 B 如果壓力仍然很高,則在色譜柱的另一端查找堵塞位置(例如:通入檢測器或從其通出的管路)。
②. 如果取出色譜柱后壓力依然很高,則檢查從排氣閥到自動進樣器的管路。如果壓力正常,則使用進樣步驟命令將自動進樣器的進樣閥切換到旁路狀態。 A 如果壓力正常,則說明自動進樣器堵塞。請檢查針、針座、針座毛細管和轉子密封墊。 B 如果壓力依然很高,則檢查從進樣六通閥到色譜柱入口之間的管線.。

10 用不同批號的色譜柱后如何對分析方法進行測試并確認可用此柱?
首先,在色譜柱包裝盒的外面找到它的批號。批號的字體比較小,通常在條形碼的下面。批號通常以字母“B”開頭,后面是 5 位阿拉伯數字。例如,下面示例中的色譜柱批號為 B99091。 如果找不到包裝盒,則查看色譜柱標簽上的序列號。要從序列號來確定批號,請撥打安捷倫科技公司 HPLC 色譜柱技術支持的電話,號碼為 800-820-3278。他們會請公司生產部門來查詢批號,同時確定其它哪些批號的色譜柱可用。 獲得所需的批號或知道您的批號后,可使用以下步驟進行訂購: 從安捷倫科技公司或首選的經銷商進行訂購。使用特殊的部件號 899999-888, 該號碼表示此訂單是專用色譜柱。 說明要訂購的色譜柱的類型、尺寸和填料粒度大小,包括通用部件號。指出您希望色譜柱是哪個批號,或者哪個批號的色譜柱不能用。示例說明: 部件號 899999-888 Eclipse XDB-C18 分析色譜柱,4.6mm x 250mm,(963967-902) 除了批號為 B99091 和 B99079 的專用色譜柱 用于方法確認目的的色譜柱

11 如何避免峰拖尾和峰分叉?
與色譜柱相關的原因及處理方法
1 色譜柱污染; 處理方法:清洗或更換色譜柱
2 色譜柱填料有問題;處理方法:反沖色譜柱或更換柱頭過濾片
3 色譜柱中間出現間斷;處理方法:更換色譜柱或填充空隙
4 保護柱失效;處理方法:更換保護柱
5 樣品分布差;處理方法:改進色譜柱進口的設計
6 與色譜柱無關的原因:柱外體積大、樣品過量、流動相組分(添加劑、pH值、緩沖液濃度)改變。

12 什么原因導致液相色譜出現神秘峰”?
與色譜柱相關的原因:
1 色譜柱污染; 處理方法:清洗或更換色譜柱
2 保護柱失效; 處理方法:更換保護柱
3 與色譜柱無關的原因:流動相溶不純、樣品里有其他成分、系統里有氣泡、電路問題。

13 什么原因導致柱效(理論塔板數)下降?
與色譜柱相關的原因:
1 色譜柱中間出現間斷;處理方法:使用類似的填料填充空隙或更換色譜柱
2 保護柱無法再用;處理方法:更換保護柱
3 其他可能的原因:柱外體積大、進樣的樣品量大、樣品溶劑強度比流動相大、流動相的改變。

14 改變填料孔徑大小對液相色譜分離有什么影響?
填料孔徑越小,允許的流動相線速度越高。最佳流動相線速度取決于固定相的顆粒大小。在最佳線速度時,色譜柱生成的理論塔板數最多。對于內徑為 4.6mm 的色譜柱,10um 的顆粒流動相線速度為 0.75ml/min 或 5um 的顆粒流動相線速度為 1.5ml/min 時,塔板數最多。

15 改變色譜柱直徑對液相色譜分析有什么影響?
如果色譜柱直徑減半,則靈敏性增加四到五倍(假設進樣量不變)。例如,等量的樣品進樣到內徑為 2.1mm 的色譜柱比進樣到內徑為 4.6mm 的色譜柱所生成的峰高 5 倍左右。 只要線性流動保持不變,則柱效率、理論塔板數、反壓和分析時間等參數均與色譜柱內徑的減小無關。

16 改變填料顆粒大小和色譜柱的長度對液相色譜分離有什么影響?
如果填料顆粒大小減半,則理論塔板數加倍(假設柱長不變)。如果填料顆粒大小減半,則柱壓增加為原來的四倍。 如果柱長加倍,則理論塔板數加倍。如果柱長加倍,則分析時間加倍。隨著柱長增加,柱壓也線性地增加。 以下是一個根據上述信息選擇色譜柱的示例: 一個裝填 10um 填料的長度為 200mm 的色譜柱可生成 6000 塊理論塔板,這是在很多情況下能提供比較適當的分離的色譜柱效率。將顆粒大小由 10um 減小到 5um,柱長仍為 200mm,則可生成 12000 塊理論塔板。然而,這個色譜柱可生成相當于原來四倍的柱壓。通常情況下不需要生成 12000 塊塔板,因此柱長可減半至 100mm,結果生成 6000 塊塔板,同時分析時間也縮短一半;柱壓僅比最初裝填 10um 填料的長度為 200mm 的色譜柱高兩倍。

17 能否提供一種與我使用的LC 色譜柱相同的色譜柱?
即使用同一種固定相,不同廠商的液相色譜柱也可能具有不同的保留時間。 雖然這里提供了一些不同廠商的色譜柱的參考數據,但這些數據在不同的色譜條件下會有所不同。我們通常根據您的應用情況,向您推薦一種其它的色譜柱。在此之前,我們需要您提供以下信息: 樣品的詳細信息(樣品的成分和要分析的成分); 是否可以接受液相色譜條件的改變; 能否對您的方法進行一些調整。 如果您不能接受分析條件和/或保留時間的改變,則應該繼續使用目前的色譜柱。

18 如何選擇液相色譜保護柱?
保護柱的作用是用來防止分析柱被一些微粒物質堵塞,及在色譜柱上強吸附組分在色譜柱上吸附。為防止樣品的雜質不進入色譜分析柱,不出現不必要的峰展寬,保護柱與分析柱的體積比應在 1:15 至 1:25 之間。 在理想的情況下,保護柱的填料應與分析柱相同,以確保得到分析柱較好的色譜圖。盡量使保護柱與分析柱近似。在我們的目錄里,將分析柱和與其配套的保護柱列在一起。

19 色譜圖上出現鬼峰。如何消除?
可能的原因有:
1. 上次進樣遺留組分產生
2. 有污染
3. 有氣泡
4. 色譜柱問題
5. 保護柱失效
建議用戶:
1. 做樣品后應保證有足夠時間沖洗色譜柱,。有必要的話在運行結束后使用更強溶劑沖洗色譜柱。
2. 洗脫原色譜柱中的原有污染。
3. 為確保系統中沒有氣泡,只使用徹底脫氣后的溶劑。
4. 更換色譜柱。
5. 更換保護柱。
6. 檢查流動相純度。
7. 檢查樣品中的其他成分.

 
20 我的色譜圖上的峰有拖尾現象。如何改善峰形?
可能的原因:
1. 系統內的死體積大
2. 樣品在色譜柱上有吸附
3. 色譜柱使用時間很長
建議用戶:
1. 盡量減少流動相管線的死體積,確保管線接頭的連接合適減小死體積,由于不同生產廠家的管線的接頭和密封墊圈有可能不一樣,盡量使用安捷倫公司的管線接頭和密封墊圈。
2. 使用洗脫更強的流動相
3. 更換新色譜柱

21 什么原因導致基線波動?
基線波動有可能與實驗室的溫度及濕度變化有關系。需確保室溫及濕度穩定,將儀器從通風櫥中取出,并將色譜柱和毛細管進行隔熱保溫。

22 什么原因導致基線毛刺?
這很有可能是流動池內有氣泡。請先停泵來進行確認,如果毛剌消失,則很有可能是由于流動池內有氣泡。需要沖洗流動池。如果毛剌仍然存在,則需檢查檢測器本身的電噪音有關。如果需要更多幫助,則請致電安捷倫科技公司。在中國,請撥打800 820 3278。

23 如何減少基線噪音?
無規律噪音可能與污染有關。請沖洗色譜柱,對樣品做合適的前處理以避免污染,并使用 HPLC 級別的溶劑。 連續噪音有可能由檢測器或泵造成。要確定問題是否發生在檢測器還是在泵,請先關泵停掉流量,監測基線。如果此時基線平穩,則噪音可能與泵有關系。使用 ChemStation 在線診斷或 LC 手持控制器檢查泵方面的故障。如果停泵后噪音繼續存在,則說明噪音與檢測器有關。首先,請嘗試更換燈。如果問題依然存在,則請與安捷倫科技公司聯系。在中國,請撥打800 820 3278。

24 如何避免液相基線飄移?
基線向上飄移表明系統中有污染。請沖洗色譜柱,凈化樣品,然后使用新溶劑。 向下飄移通常是由于檢測室或柱箱中的溫度波動的原因。減小室溫變化,將儀器從通風櫥中取出,并將色譜柱和毛細管保溫隔熱。向下飄移也可能由于溶劑的純度不是 HPLC 級別的溶劑而且此純度低的溶劑在紫外有吸收。

25 如何排除流動相/流動池中的氣泡?
避免流動相中產生氣泡的最佳方式是將流動相經脫氣裝置進行脫氣。如果沒有脫氣裝置,則可以在流動相溶劑瓶中通入氦氣進行脫氣。也可以在檢測器的出口端加一根細管線以調節流動池中的背壓,但必須注意不要超過流動池的最大壓力,否則會造成流動池漏液或流動池損壞。 如果流動池中出現氣泡,則先摘下色譜柱,用一根管線直接將流動相接入檢測器的入口。將異丙醇以較大的流速注入流動池。 直到基線上看不到尖峰為止。氣泡就應該清除掉了。

 
 

(來源: 安捷倫科技 )


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