來寶網Logo

熱門詞:生物顯微鏡 水質分析儀 微波消解 熒光定量PCR 電化學工作站 生物安全柜

現在位置首頁>技術資料首頁>實驗技術>生物技術>高效液相色譜法檢測黃曲霉毒素M1操作規程

高效液相色譜法檢測黃曲霉毒素M1操作規程

廣州深華生物有限公司2011年12月29日 15:28 點擊:1434

  針對近期奶中出現的黃曲霉毒素M1超標問題,廣州深華生物公司提出以下快速解決方案。

  1. 儀器

  1.1 高效液相色譜儀配熒光檢測器

  1.2 震蕩器(或高速攪拌器)

  1.3 高速離心機

  2. 試劑與試液

  2.1 色譜甲醇

  2.2 蒸餾水

  2.3 乙腈+水(25+75)

  2.4 石油醚

  2.5 10%乙腈

  2.6 氫氧化鈉溶液(0.5mol/L)

  玻璃纖維濾紙(PriboFast免疫親和柱免費贈送)

  3. 測定法

  本法系用高效液相色譜法(GB/T 18980-2003)測定牛奶,奶粉等產品中的黃曲霉毒素M1,除另有規定外,按下列方法測定。

  3.1色譜條件

  色譜柱:C18柱,150×4.6mm,5um

  檢測器:熒光檢測器;激發波長365nm,發射波長435nm;

  流動相:乙腈-水(25:75)

  流 速:1.0ml/min

  進樣量:20ul

  柱 溫:室溫

  3.2 標準品溶液的配制

  取黃曲霉毒素M1標準品,用乙腈稀釋成0.5ug/ml的標準儲備液。根據使用需要,準確吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黃曲霉毒素標準儲備液,置5ml的容量瓶中,用流動相稀釋至刻度,配成相當于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的標準工作液,即得。

  3.3 樣品前處理

  3.3.1牛奶

  將100mL牛奶水浴加熱至40℃;

  4000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用;

  3.3.2乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品

  稱取10g奶粉樣品,將100mL50℃水多次少量加入,攪拌,使奶粉充分溶解;

  6000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用;

  3.3.3發酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)

  稱取60 g混勻的試樣,用0.5mol/L 的氫氧化鈉溶液在酸度計指示下調pH至7.4;

  用高速均質器在 9500 轉/分鐘,高速勻漿5 min

  水浴加熱至40℃;

  4000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用

  3.3.4干酪

  稱取經切細、過10目圓孔篩混勻的試樣5g置于50mL離心管中,加2 mL水和30 mL甲醇;

  用高速均質器在 9500r/分鐘,高速勻漿5 min;

  超聲提取30 min;

  在6000r/分鐘下離心15 min,收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。

  在分液漏斗中加入30 mL石油醚,振搖2 min;

  待分層后,將下層移于50 mL燒杯中,棄去石油醚層。

  重復用石油醚提取2次;。

  將下層溶液移到100 mL圓底燒瓶中,減壓濃縮至約2 mL;

  濃縮液倒入離心管中,燒瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗滌,洗滌液一并倒入50 mL離心管中;

  加水稀釋至約50 mL,在6000 轉/分鐘下離心 5 min,上清液供凈化處理。

  3.3.5奶油

  稱取5g試樣,置于50 mL燒杯中;

  用20 mL石油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。

  加20 mL水和30 mL甲醇,振蕩30 min后,將全部液體移于分液漏斗中;

  待分層后,將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中,在旋轉蒸發儀中減壓濃縮至約5 mL,加水稀釋至約50mL,供凈化處理。

  3.4 供試品溶液的制備

  3.4.1 PriboFast® 黃曲霉毒素M1免疫親和柱的操作

  將免疫親和柱連接于50.0mL玻璃注射器下。準確移取50.0mL凈化溶液注入玻璃注射器;

  將空氣壓力泵與注射器連接,調節壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

  更換10ml注射器與親和柱連接,在注射器中加入10ml水,調節壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

  準確加入4mL色譜級乙腈洗脫,流速為1 mL/min~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。(建議將乙腈的量分2-4次加入。每次加入后,要讓甲醇充分浸泡柱子里的凝膠2分鐘。洗脫后的乙腈溶液,最好是水浴30℃加熱吹近干。用10%乙腈定容后上液相)

  3.5 測定

  精密量取1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的標準工作液各20ul,注入液相色譜儀,測定峰面積,以峰面積為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。另精密量取供試品溶液20ul,注入液相色譜儀,測定峰面積,從標準曲線上讀出供試品中相當于黃曲霉毒素M1的量,計算,即得。

  1.本實驗應有相應的安全、防護措施,并不得污染環境。

  2.殘留有黃曲霉毒素M1的廢液或廢渣的玻璃器皿,應置于專用貯存容器(裝有10%氯酸鈉溶液)內,浸泡24小時以上,再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。
 

(來源: 廣州深華生物有限公司


全年征稿 / 資訊合作

聯系郵箱:[email protected]

版權與免責聲明

  • 凡本網注明“來源:來寶網”的所有作品,版權均屬于來寶網,轉載請必須注明來寶網, http://www.vhyrck.live,違反者本網將追究相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其它來源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點或證實其內容的真實性,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
35选7开奖查询